干細胞是一類具有無限的或者永生的自我更新能力的細胞、能夠產生至少一種類型的、高度分化的子代細胞[1]。干細胞被認為可以提供一種理想的生物學平臺, 用于多方面的科學研究與臨床應用, 如藥物篩選平臺的建立、細胞發育與分化的分子調節機制研究、基因靶向敲除動物模型的構建、組織工程種子細胞及基因治療載體的建立、細胞治療及再生醫學等[2]。

干細胞研究離不開干細胞的培養。合格的干細胞培養的過程，包括促進其分裂增殖和維持其未分化狀態�；�于以上兩點要求，目前主流的標準培養方法為飼養層培養法：即在有絲分裂失活的飼養層細胞 （FEEDER） 上培養干細胞。培養體系一般為高糖DMEM，添加適量的胎牛血清 （FCS） 及白血病抑制因子 （LIF）、L-谷氨酰胺等添加劑。另外，為了避免外源性物質的干擾（如血清、病原等成分）[3]，又嘗試及建立了其他培養基, 包括條件培養基 （CM） 、無飼養層、無血清、血清替代物 （SR） 非條件培養基等。其中無血清培養基中添加了更多珍貴的細胞因子，而血清替代物培養基則采用人工/半人工合成分子替代物的形式，來替代血清，成本相較于普通胎牛血清完全培養基而言，高出不少。

一、飼養層培養法

目前認為，飼養層能夠提供的干細胞接觸所必須的復雜蛋白分子。自1981年EVANS等人[4]用飼養層成功培養了mESC起，飼養層培養法便開始不斷發展。實驗過程，主要分為以下三步：準備飼養層細胞、飼養單層制備、接種干細胞培養。

飼養層培養法卻存在著不可避免的缺點：

1、 飼養層細胞生命期有限，不能在體外長期傳代。在體外傳代時間太長，其產生促增殖因子和抑制分化因子的能力會減弱甚至喪失。

2、 MEF細胞的染色體干擾：飼養層細胞會影響干細胞遺傳物質。 　

3、 絲裂霉素-C的影響：飼養層細胞需要用到絲裂霉素-C，該物質可能會影響干細胞的增殖。

4、 異種抗原及污染的影響：飼養層細胞作為異種抗原也會影響干細胞的健康，還有發生細胞間融、引入其他動物源性病原體，給臨床移植治療帶來風險。

5、 所用試劑復雜，批次不可控：所用材料的批次之間的波動，限制了培養物之間的可重復性。

6、 實驗周期長，培養基配制復雜：現在市場上有多種多樣的干細胞培養基可供選擇，大多數都是在基礎培養基的基礎上，添加例如白血病抑制因子（LIF）[6]這樣的多功能細胞因子，但無論進口還是國產的產品，都不免有價格高昂的缺點。而自己配制，又會面臨操作繁瑣、易污染等問題。而且飼養層培養發從培養飼養細胞開始，至少需要一周時間才能得到所需的干細胞，周期過長。

二、無飼養層培養

無飼養層培養類似普通細胞培養，主要分為以下幾個步驟：培養瓶預處理、配制培養基、消化干細胞、接種、培養。

相較于飼養層培養法，無飼養層培養法的優點顯而易見：更加簡便、節省時間；但缺點也十分明顯：

1、 培養的細胞質量不穩定：由于自行配制的培養基，不可控因素較多，缺少營養細胞對的存在，干細胞生長狀況也不穩定，直接影響實驗結果。

2、 成本高昂：商品化的培養基，根據品質不同，價格也是從幾百元到幾千元不等，直接增加了干細胞的培養成本。

3、 需要不斷對培養基進行調整，對實驗人員有很高的要求：無飼養層培養法需要人為添加各種各樣的細胞因子，不同的干細胞還需要進行細微的調整以適應不同的生長需求，因此培養難度更高，對技術人員的操作水平及經驗有很高的要求

三、干細胞完全培養基培養法

我們都知道一直以來，干細胞的培養方法被飼養層培養法和無飼養層培養法所“統治“，近日，一項新技術——干細胞完全培養基培養法問世！這項重大突破，兼顧了上述兩種培養法的優點又巧妙規避了它們的致命缺點，大大降低了干細胞培養的技術門檻！

干細胞完全培養基是一種真正意義上的全新干細胞培養技術！在含微量胎牛血清的基礎培養基中，通過添加一種人永生化干細胞系的條件培養基混合組成。干細胞完全培養基含有多種促進細胞增殖的生長因子，如表皮生長因子（EGF）、成纖維細胞生長因子（FGF）、神經細胞生長因子（NGF）、肝細胞生長因子（HGF）、腦源性神經營養因子（BDNF）、血小板衍生生長因子（PDGF）、血管內皮生長因子（VEGF）、轉化生長因子（TGF）及干細胞分化抑制因子等。因此，干細胞完全培養基具有促進干細胞增殖、抑制干細胞分化及維持干細胞表型，增加干細胞的傳代次數的作用，可廣泛應用于人及動物的胚胎干細胞、間充質干細胞及各種組織來源的成體干細胞的培養。

由于人永生化干細胞系的使用，使得干細胞完全培養基無需額外添加細胞因子或其他人工合成促生長成分，因此，相較于其他商品化的干細胞培養基、干細胞培養Kit、無血清培養基、血清替代物 （SR） 非條件培養基等產品，用干細胞完全培養基進行實驗，成本相對更低，但效果卻是更上一層樓。

縱觀整個干細胞培養基市場，能同時滿足以上幾個條件的產品可以說是鳳毛麟角。而Ausbian干細胞完全培養基則是其中的優秀代表，讓實驗者可以輕松上手，各種干細胞培養都變得小菜一碟！

首先，Ausbian干細胞完全培養基擁有獨家技術，使得培養基本身就含有豐富的細胞因子，其中包含了所有含有促進干細胞生長和抑制干細胞分化的各種因子，因此能夠有效維持干細胞的干性，抑制干細胞的分化。

其次，無需額外添加和二次配制，更省去了體現制備飼養層的復雜操作，根據細胞生長情況每2-3天更換一次培養基。這在無形之中減少了細胞培養的實驗步驟，熟悉細胞實驗的小伙伴應該都知道，實驗步驟越簡潔，不可控因素也就越少，實驗出錯的概率也會更低，因此，使用干細胞完全培養，使實驗更簡單，可以大大縮短時間成本；培養的干細胞品質更穩定，對實驗人員技術要求也更低，節省人力成本，輕輕松松讓干細胞茁壯成長。

不僅如此，因為少了飼養細胞的干擾，也沒有絲裂霉素-C等物質的添加，所以用Ausbian干細胞完全培養基能夠收獲純度更高、遺傳物質更穩定的干細胞。

在培養細胞有效性方面，許多科研人員對其進行了評估：培養間充質干細胞可以細胞傳代次數8-10次、培養成體干細胞可以使細胞的增殖速率增加300%，實驗數據真實可靠。

1. 人成體干細胞（3代）增殖實驗：CCK8分析

干細胞培養基 對比 Ausbian干細胞專用培養基（細胞培養72小時）

2. 人間充質干細胞（3代）增殖實驗：CCK8分析

a-MEM、干細胞培養基 對比 Ausbian干細胞專用培養基

3.細胞傳代次數：

Ausbian干細胞完全培養基另外一項革命性的突破在于，可廣泛應用于人及動物的胚胎干細胞、間充質干細胞及各種組織來源的成體干細胞的培養，省去了更換細胞時反復調試培養基的繁瑣步驟，極高的普適性進一步降低了人力、物力以及時間成本。

說完有效性再來看看安全性。Ausbian干細胞完全培養基均經過嚴格的質量檢驗，無論是支原體還是衣原體檢測均為陰性，無農藥污染及重金屬超標，同時還進行了放射性照射，確保培養基無任何病原體及病毒污染，確保內毒素極低，為干細胞提供一個安全健康的生長環境。

最后要說明的是，Ausbian干細胞完全培養基是我國的科學家自主研發的，其中制備的永生化人干細胞系為具有獨特性，制備產品所使用的永生化人干細胞系國內同類產品，貨源充足，供貨穩定，供貨周期短，保證干細胞生長過程中不會出現“斷糧”的情況，讓實驗者更安心！

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參考文獻：

1. 裴雪濤．干細胞生物學：科學出版社，2003：4-15

2. 吳靜,胡東,張榮波.胚胎干細胞培養方法研究進展[J].廣東醫學,2010,31（01）:116-118.

3. J.A. Burdick, G. Vunjak-Novakovic Engineered microenvironments for controlled stem cell differentiation Tissue Eng. Part A, 15 （2009）, pp. 205-219

4. Evans MJ, Kaufman MH. Establishment in culture of pluripotential cells from mouse embryos. Nature. 1981 Jul 9;292（5819）:154-6. doi: 10.1038/292154a0. PMID: 7242681.

5. 田小利，陳蘭英，扈萊良. 1994.　轉基因方法Ⅱ：胚胎干細胞法. 轉基因動物原理、技術與應用. 吉林科技出版社， 26～32

6. Williams RL, Hilton DJ, Pease S. 1988. Myeloid leukaemia inhibitory factor maintains the developmental potential of embryonic stem cells. Nature, 336: 684～687

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